تولید ، تخلیص و شناسایی ایمونوگلوبین زرده (igy ) ضد سویه مقاوم به آنتی بیوتیک سودوموناس آئروجنوزا (pseudomonas aerogenosa ) در مرغ های تخم گذار

در این مطالعه باکتری سودوموناس آئروجنوزا از کلینیک ویژه بیمارستان قائم مشهد بخش میکروبیولوژی و تهیه اتوواکسن گرفته شد و باکتری به دیسک های آنتی بیوتیک تجاری آمیکاسین ،توبرامایسین ،کلرامفنیکل ،کلستین،تتراسیکلین،سفالوتین ،جنتامایسین،سفکسیم،کلرتتراسایکلین،آزیترومایسین،مقاوم بود . پس از آن جهت تایید مجدد باکتری با استفاده از آزمایش های بیوشیمیایی و تزریق داخل صفاقی برای تعین حدت باکتری صورت گرفت . در این مطالعه تعداد 4 عدد مرغ hy-line w-36 در دو گروه کنترل (3عدد مرغ ) و شاهد ( ا عدد مرغ ) به طور تصادفی مورد تزریق آنتی ژن باکتری کشته شده با فرمالین سودوموناس آئروجنوزا قرار گرفتند . به گروه کنترل میزان 1 میلی لیتر واکسن سودوموناس آئروجنوزا تزریق شد . به گروه شاهد میزان 1 میلی لیتر واکسن فاقد آنتی ژن سودوموناس آئروجنوزا ترکیب شده با ادجوانت کامل فروند تزریق گردید . دو تزریق دیگر به وسیله ی ادجوانت ناقص فروند به فاصله ی دو هفته از سن 16 هفتگی انجام گرفت . تخم مرغ ها به صورت روزانه جمع آوری و روی هر کدام به طور جداگانه اطلاعاتشان ثبت می گردید و در دمای 4درجه سانتیگراد ذخیره گردید. مرغ ها در شرایط ایده آل نگهداری می شدند . بعد از خالص سازی آنتی بادی از تخم مرغ ها با استفاده از روش پلی اتیلن گلیکول 6000 به بررسی عملکرد آنها پرداخته شد . نتایج میکروبیولوژی باکتری میله ای گرم منفی و همولیز اطراف پرگنه ، بوی پرگنه ، تحرک باکتری ، ذوب و هیدرولیز ژلاتین ، مصرف و اکسیداسیون گلوکز، عدم مصرف و اکسیداسیون ترهالوز و عدم هیدرولیز نشاسته موید حضور باکتری بود و نتایج تلقیح داخل صفاقی نشان داد که حداقل دوز کشنده ی باکتری cfu 107× 1.5 است . نتایج بدست آمده از الکتروفورزsds-page حضور باند های پروتئینی 27 و 67 کیلودالتونی که موید حضور زنجیره های سبک و سنگین igy است را نشان داد . اختصاصیت آن با استفاده از روش های دات بلات و الایزا مورد سنجش قرار گرفت آزمایش دات بلات که به صورت کیفی اختصاصیت آنتی بادی –آنتی ژن را نشان می دهد هم این یافته را تایید کرد . در مرحله آخر از الایزا برای سنجش میزانی از آنتی بادی که قادر به شناسایی آنتی ژن است در غلظت های mg/ml 1 ، mg/ml 0.5 و mg/ml 0.25 استفاده گردید . میزان جذب نوری بین گروه آنتی بادی اختصاصی و آنتی بادی گروه غیر اختصاصی با استفاده از نرم افزار آماری مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و نتایج آزمایش نشان داد که بین دو گروه رابطه ی معنی داری وجود دارد و تزریقات توانسته است منجر به افزایش تیتر آنتی بادی اختصاصی ضد سودوموناس ائروجنوزا گردد